淋巴細胞分離液的分離原理：淋巴細胞的方便來源是外周血，分離的原則是收率較高，純度較好，失活較低，根據(jù)不同試驗有相對純度，無論采用哪種方法，應(yīng)盡zui大可能保持細胞應(yīng)有活性。分離的技術(shù)可根據(jù)細胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計，根據(jù)不同實驗?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實驗采用的1就是密度梯度離心法。其原理是：人外周血中各種細胞的密度不同，人紅細胞密度為1.093，粒細胞為1.092，淋巴細胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細胞比重的差異，利用比重介于某兩類細胞之間的細胞分離液對血液離心，使一定比重的血細胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨立帶，從而達到分離的目的。

   

淋巴細胞分離液的分離方法：

    1．采靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉），3ml加入普通管。

    2．普通管斜面放置30MIN，此時可分離淋巴細胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁（主張用玻璃棒），2000rPm離心20分鐘，用毛細吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于以后的ELISA實驗，對流免疫電泳實驗和傷寒試管凝集實驗，溶血反應(yīng)，免疫比濁測定補體C3或C4等等。（剝離時也可用毛細吸管輕輕剝離）

    3．趁普通管放置30MIN時，將裝有靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉）輕輕搖動使血液與抗凝劑混勻，出現(xiàn)凝集不能繼續(xù)實驗。5min后加入Hank's 液2ml，手動輕輕搖勻。

    4．用毛細吸管吸取抗凝血，將抗凝血全部沿管壁緩慢加至另一含2ml淋巴細胞分離液  液面上，注意保持兩種液體界面清晰。

    5．將試管平衡后置水平式離心機，2000rpm離心10min。

    6．用毛細吸管仔細吸取血漿與分層液界面處淋巴細胞層至一刻度離心管內(nèi)。

    7．加入Hank's 液5ml，手動旋轉(zhuǎn)試管使液體混勻，2000rpm離心10min，棄上清，沉淀即主要為淋巴細胞（或單位個核細胞）。 備注：如做淋巴細胞轉(zhuǎn)化或其它培養(yǎng)，所用試劑、器材應(yīng)是無菌的。Hank's 液為緩沖等滲液，類似營養(yǎng)液，保持細胞活性及完整性，可抵抗輕微的酸堿變化。